Baltymo kiekio nustatymas Bredfordo metodu

Tikslas:

Nustatyti baltymo kiekį mėginyje Bredfordo metodu.

Darbo eiga – rezultatai

1. Į 8 mėgintuvėlius pripyliau atitinkamai 5, 10, 15, 20 µL jaučio serumo albumino tirpalo ir į kiekvieną mėgintuvėlį įpyliau atitinkamai iki 100 µL 0,15M NaCl tirpalo. Į 9 ir 10 mėgintuvėlius įpiliau tik po 100 µL 0,15M NaCl tirpalo.
2. Į visus mėgintuvėlius įpyliau po 1 ml Kumasi briliantinio mėlio G250 ir sumaišiau. Laikiau kambario temperatūroje 5 min.
3. Spektrofotometru išmatavau sugertį ties λ=595nm. Nubraižiau kalibracinę kreivę.
4. Nežinomos koncentracijos baltymą skiedžiau 10 kartų. Į 10 µL baltymo įpyliau 90 µL vandens. Paėmiau 2 µL tirpalo, įpyliau iki 100 µL 0,15M NaCl tirpalo ir 1 ml Kumasi dažo. Sumaišiau ir 2min laikiau kambario temperatūroje.
5. Spektrofotometru išmatavau baltymo sugertį, baltymo kiekį nustačiau iš kalibracinės kreivės.