Lizocimo išskyrimas, elektroforezė

Darbo tikslas: Jonų mainų chromatografijos metodu išgryninti lizocimą iš kiaušinio baltymo.

Darbo eiga/rezultatai: 1. 4 mL kiaušinio baltymo skiedėme 40 mL buferio G. Viską gerai išmaišėme magnetine maišykle. 2. Centrifugavome 10000xg 5min. Nuosėdas išmetėme. 3. Paėmėme supernatanto mėginį (0,5 ml) baltymo koncentracijai nustatyti ir elektroforetinei analizei atlikti [1mėg.]. 4. Į supernatantą įdėjome 1,5 g CM celiuliozės ir 15min. magnetine maišykle maišėme kambario temperatūroje. 5. Centrifugavome 5000xg 5min. 6. Paėmėme supernatanto mėginį (0,5ml) baltymo koncentracijai nustatyti ir elektroforetinei analizei atlikti [2mėg.]. 7. Nuosėdas užpylėme nedideliu kiekiu buferio G, išmaišėme, viską supylėme į chromatografinę kolonėlę. 8. Plovėme kolonėlę G buferiu, kol eliuate neberadome baltymų. Baltymo koncentraciją matavome spektrofotometru, absorbciją esant 280nm bangos ilgiui. Išmatavome kolonėlės tūrį πR2L: R - kolonėlės vidinio tūrio spindulys, cm; L - CM celiuliozės stulpelio aukštis kolonėlėje, cm. 9. Leidome per kolonėlę 1,5 tūrį buferio G su 0,5M NaCl, esant pratekėjimo greičiui 2ml/min. Rinkome frakcijas po 2ml. Frakcijose matavome baltymo koncentraciją. 10. Iš didžiausią baltymo koncentraciją turinčios frakcijos ėmėme mėginį (0,5ml) baltymo koncentracijai nustatyti ir elektroforetinei analizei atlikti [3mėg.]. 11. Paruošėme žinomos koncentracijos lizocimo tirpalą. Iš jo ėmėm mėginį elektroforetinei analizei atlikti [4mėg.]. 12. Išmatavome paimtuose mėginiuose baltymo koncentraciją.